關(guān)注:什么叫融合蛋白?融合蛋白的制備方法是什么?
什么叫融合蛋白?
融合蛋白有兩種不同的含義,一種是通過(guò)DNA重組技術(shù)得到的兩個(gè)基因重組后的表達(dá)產(chǎn)物,另一種是介導(dǎo)兩個(gè)細(xì)胞質(zhì)膜融合的一組蛋白,如在仙臺(tái)病毒脂雙層外側(cè)小葉中含有的兩種糖蛋白之一,介導(dǎo)病毒被膜與宿主細(xì)胞質(zhì)膜的融合作用。另一種糖蛋白是血細(xì)胞凝集素神經(jīng)酰胺酶。 兩個(gè)不同的蛋白質(zhì)既可以通過(guò)化學(xué)方法也可以通過(guò)基因的融合來(lái)連成一個(gè)大分子。
融合蛋白的制備方法是什么?
基于重復(fù)結(jié)構(gòu)的融合蛋白大多為短肽,不具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu),因此只需簡(jiǎn)單的多肽合成過(guò)程即可獲得目標(biāo)蛋白。由單個(gè)氨基酸合成多肽主要通過(guò)兩個(gè)氨基酸之間脫水形成肽鍵來(lái)實(shí)現(xiàn),主要包括以下基本步驟::首先對(duì)兩性離子結(jié)構(gòu)的氨基酸進(jìn)行相應(yīng)的氨基或羧基保護(hù),其次將羧基活化為活性中間體,待耦合過(guò)程結(jié)束后,對(duì)肽鏈上氨基酸的保護(hù)基團(tuán)選擇相應(yīng)的方式進(jìn)行選擇性的脫除或者是全脫除。目前常用的多肽合成方法為液相合成和固相合成兩種。液相合成法是將所需的氨基酸配制成溶液,并對(duì)其中一個(gè)氨基酸的氨基、其余氨基酸的羧基和不參與反應(yīng)的側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)基團(tuán)保護(hù),只活化參加反應(yīng)的氨基酸的羧基,待耦合反應(yīng)完成后再將沒(méi)有參加反應(yīng)的原料、活化劑等分離除去,得到純化多肽產(chǎn)物。這種方法雖然操作繁瑣,卻具有目標(biāo)產(chǎn)物純度高的優(yōu)勢(shì)。而固相合成法,則是將多肽序列C端的第1個(gè)氨基酸的羧基通過(guò)酯化反應(yīng)固定于不溶性的樹(shù)脂上,進(jìn)而以此氨基酸作為氨基組分,脫除其氨基保護(hù)基團(tuán)并同過(guò)量的活化后的羧基組分耦合形成肽鍵,重復(fù)脫保護(hù)、縮合、洗滌過(guò)程持續(xù)合成,獲得所需的肽鏈。合成完成后,再試用三氟乙酸將產(chǎn)物從樹(shù)脂上切割下來(lái),同時(shí)脫除所有保護(hù)基團(tuán),純化回收獲得所需多肽。
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